更短的脈沖會產(chǎn)生更亮的信號

多光子和高次諧波等非線性依賴于脈沖激光峰值功率。峰值功率的提高，增加了同時發(fā)生多光子吸收的概率。例如雙光子熒光與三光子熒光信號分別與入射光強度的平方和三次方成比例。對于激光器峰值功率的增加，相應(yīng)的激發(fā)熒光信號隨之增加。低于50fs的脈沖寬度能夠明顯提高多光子效率和高次諧波產(chǎn)生效率，進而明顯提高成像質(zhì)量（亮度）。如下圖所示，展示了雙光子（SHG）和三光子（THG）信號強度與脈沖持續(xù)時間[1,2](SHG強度-1/τ)之間的關(guān)系。

值得一提的是，如果顯微鏡光學(xué)器件中的色散沒有得到適當(dāng)補償，脈沖將被拉伸，并且將在樣品處測量較低的峰值功率。在這種情況下，脈沖持續(xù)時間和高次諧波產(chǎn)生效率之間的關(guān)系無法通過實驗精確驗證。為了產(chǎn)生足夠的非線性SHG和THG信號，以在對樣本溫和的平均功率水平下實現(xiàn)所需的信噪比，50 fs以下的脈沖和色散預(yù)補償?shù)氖褂檬潜夭豢缮俚摹?/p>

50fs光纖飛秒激光器——VALO系列

雙光子吸收和頻產(chǎn)生非線性過程，這要求及其強的電場強度，而電場取決于聚焦光斑的大小和激光器脈寬。聚焦光斑越小、脈寬越窄、雙光子吸收效率越高！

基于光纖激光器——VALO，其具有靈活性、易用性和低維護成本。是現(xiàn)代雙光子成像領(lǐng)域得力光源！緊湊型VALO Aalto和VALO Tidal激光器以30MHz的重復(fù)頻率提供＜50fs的脈沖，單脈沖能量分別是6.6nJ與66nJ，平均功率分別為200mW與2000mW。光束質(zhì)量無對準(zhǔn)的高質(zhì)量光束（Aalto的典型M²＜1.1，Tidal的典型M²＜1.2）并且集成了色散預(yù)補償模塊。

VALO飛秒激光器采用被動冷卻方式、不需要水冷與風(fēng)冷散熱。并且前面提及，超短脈沖和更好的光束質(zhì)量，可以擁有更高的光子轉(zhuǎn)換效率、并且較低的平均功率對于觀察活體細胞而言，對細胞或組織的損傷更低。

VALO系列飛秒光纖激光器

<50 fs 脈沖持續(xù)時間
高達 2 W 的輸出功率
極低的噪音
集成預(yù)補償色散模塊

應(yīng)用實例1

長時間觀察活體細胞過程中，光損傷是限制因素之一。在實驗過程中高平均功率的持續(xù)照射對細胞本身產(chǎn)生很大影響。不過，對光毒性敏感的活細胞來說，低平均功率、小于50fs的脈沖寬度、極高的峰值功率，既減少了對細胞的損傷、又大大延長了成像時間。

例如下表統(tǒng)計所示：VALO 50fs與傳統(tǒng)200fs進行比較，同峰值功率只需要輸出1/4的激光功率，換句話來講，成像相同質(zhì)量情況下，成像效率是傳統(tǒng)200fs激光光源的4倍！同時，相比傳統(tǒng)200fs而言，還能擁有更長的成像時間，為了降低光毒性的影響，更低的重復(fù)頻率光源是首選。總的來說，VALO激光器具備這樣的優(yōu)勢條件。

VALO激光器與傳統(tǒng)激光器參數(shù)對比

下圖顯示了使用VALO系列＜50fs脈沖激光器在沒有組織損傷的情況下進行髓鞘形態(tài)的多光子成像和長時間延時采集(超過一小時)。觀察到脫軸和脫軸髓鞘膜可以研究鈉離子通道在多發(fā)性硬化(MS)疾病中的作用。

隨著鈉離子濃度持續(xù)提高，進而誘導(dǎo)髓鞘腫脹 得到的延時成像

應(yīng)用實例2

如下圖所示，顯示了來自校準(zhǔn)網(wǎng)格的三次諧波信號，樣品的平均功率為4.7mW，具有VALO系列飛秒激光器的全帶寬，產(chǎn)生約40fs脈沖。在圖b）中，激光器的光譜帶寬被限制在1064nm附近的10nm FWHM，產(chǎn)生約160 fs的脈沖。圖a）和圖b）中的圖像具有相同的比例，但圖b）中沒有顯示THG信號。只有在從較長的~160fs脈沖中重新縮放較低的THG信號后，才有可能獲得高于實驗噪聲基底的圖像，如圖c）所示。在這種情況下，需要高2.5倍的平均激光功率來實現(xiàn)與從較短的50 fs以下脈沖獲得的THG信號的信噪比相當(dāng)?shù)男旁氡葋韺崿F(xiàn)。總之，小于50fs脈沖提供了相當(dāng)高的脈沖峰值功率，這導(dǎo)致了在低得多的平均功率下的最佳信噪比圖像，這反過來減少了光漂白，并延長了細胞活力。

50μm²的校準(zhǔn)網(wǎng)格(ibidi) 的三次諧波。
a)47mW，全譜短脈沖 (<50fs;VALO系列)
b)6mW 光光譜限制在10nm帶寬 (~160fs)
c)6mw的激光光譜限制在10nm帶寬(~160fs)

展望

多光子顯微鏡在各種應(yīng)用中具有巨大的潛力，包括開發(fā)未來的診斷篩查系統(tǒng)。VALO系列飛秒激光器在50 fs以下范圍內(nèi)提供脈沖，并提供前所未有的多光子轉(zhuǎn)換效率和強大的峰值功率。這反過來又有助于推動無標(biāo)簽多光子應(yīng)用的前沿，特別是在三次諧波成像中，因為它能夠?qū)崿F(xiàn)高靈敏度的擴展活細胞成像和延時測量。

參考文獻

[1] Shuo Tang, Tatiana Krasieva, Zhongping Chen, Gabriel Tempea, Bruce Tromberg (2006), Effect of pulse duration on two-photon excited fluorescence and second harmonic generation in nonlinear optical
microscopy, Journal of Biomedical Optics, 11(2).

[2] Mira Sibai, Hussein Mehidine, Fanny Poulon, Ali Ibrahim, M. Juchaux, J. Pallud, A. Kudlinski, Darine Haidar (2018), The Impact of Compressed Femtosecond Laser Pulse Durations on Neuronal Tissue Used for Two-
Photon Excitation Through an Endoscope, Scientific Reports, 8:11124.

[3] G.M Hale and M. R. Querry (1973), Optical Constants of Water in the 200-nm to 200-microm Wavelength Region, Appl. Opt., 12, 555-563.

[4] Gert-Jan Bakker, Sarah Weischer , Júlia Ferrer Ortas, Judith Heidelin, Volker Andresen, Marcus Beutler, Peter Friedl (2022), Intravital Deep-Tumor Single-Beam 2-, 3- and 4-Photon Microscopy, eLife 11.

[5] K. Giering , O. Minet , I. Lamprecht , G. Müller (1995), Review of thermal properties of biological tissues, SPIE PM, 25, 45-65.

[6] Stephen A. Boppart, Sixian You, Lianhuang Li, Jianxin Chen, and Haohua Tu (2019), Simultaneous label-free utofluorescence-multiharmonic microscopy and beyond, cAPL Photon 4.

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針尖增強拉曼光譜（TERS）是一種強大的工具，可以用于研究組分的化學(xué)成分，獲取分子信息。然而，TERS受限于固定的激發(fā)波長，無法實現(xiàn)空間分辨的共振拉曼散射或者同時識別不同類型的碳納米管。來自于柏林自由大學(xué)（Freie Universit?t Berlin）的Mueller等人使用波長可調(diào)諧的OPO激光器（C-Wave）開發(fā)了世界上第一個實際應(yīng)用的激勵波長可調(diào)諧TERS（e-TERS）系統(tǒng)，獲得了金表面上的碳納米管薄膜在不同激發(fā)波長下的納米圖像。

e-TERS使用的系統(tǒng)如下圖所示，由三部分組成：原子力顯微鏡，拉曼光譜儀和激光激發(fā)源。為了實現(xiàn)e-TERS，用波長可調(diào)諧C-WAVE激光器（HübnerPhotonics）取代了通常使用的HeNe激光器。由于C-wave激光器可以在可見光（450-650nm）和IR（900-1300nm）范圍內(nèi)提供調(diào)諧輸出。與許多其他波長可調(diào)系統(tǒng)相比，C-Wave的主要優(yōu)點是激光束的指向穩(wěn)定性：在改變激發(fā)波長之后，激光光斑的位置在針尖上保持恒定。不需要重新調(diào)整光束路徑。激光器只需要通過20倍物鏡稍微重新聚焦，以便在多個波長下進行快速測量。

在傳統(tǒng)的TERS設(shè)置中，由于只使用單個波長激發(fā)，不可能通過在不同的波長下成像識別不同種類的碳納米管。e-TERS激發(fā)波長可以準(zhǔn)連續(xù)變化，相比于傳統(tǒng)的TERS具有巨大的優(yōu)勢。作者使用了532，568,600和633nm作為激發(fā)波長，檢測了不同的碳納米管種類，一共識別了9種不同的碳納米管。這是傳統(tǒng)的TERS無法做到的。即使對于重疊的碳納米管，e-TERS也能夠使用不同的激發(fā)波長可視化不同碳納米管的形狀和取向。e-TERS提供了識別和成像光學(xué)轉(zhuǎn)換的可能性，是分析許多材料的強大工具。通過在大分子上應(yīng)用e-TERS，可以映射其光學(xué)過渡中心和局部電子態(tài)。此外，e-TERS還可實現(xiàn)納米成像，納米級分辨化學(xué)和成分分析以及質(zhì)量控制，可以檢測和成像局部化學(xué)相互作用和化學(xué)鍵以及缺陷和應(yīng)變，這對于檢查2D材料非常有用。

碳納米管的光致發(fā)光激發(fā)圖，電鏡圖，示意圖以及拉曼光譜

不同波長下的碳納米管納米圖像

不同波長激發(fā)下得到的碳納米管結(jié)構(gòu)

C-WAVE激光器可以在可見光（450-650nm）和IR（900-1300nm）范圍內(nèi)提供連續(xù)激光輸出，并具有帶寬窄，功率穩(wěn)定性好，25GHz內(nèi)無跳模，波長改變迅速等特點，適用于表面等離子體激元，全息，共振拉曼，以及納米光子學(xué)等許多應(yīng)用。

參考文獻：

Excitation-Tunable Tip-Enhanced Raman Spectroscopy
Niclas S. Mueller? , Sabrina Juergensen?, Katja H?flich? , Stephanie Reich?, and Patryk Kusch*?
? Freie Universit?t Berlin, 14195 Berlin, Germany
? Helmholtz-Zentrum Berlin für Materialien und Energie GmbH, 14019 Berlin, Germany
J. Phys. Chem. C, 2018, 122 (49）

產(chǎn)品鏈接：

HüBNER C-WAVE OPO調(diào)諧激光器

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